Jednom stanice u kojima uzgajamo

tvornica ćelijaonečišćeni, većinom ih je teško rukovati.Ako su onečišćene stanice vrijedne i teško ih je ponovno nabaviti, za njihovo uklanjanje mogu se koristiti sljedeće metode.

1. Koristite antibiotike

Antibiotici su učinkovitiji u ubijanju bakterija utvornice ćelija.Kombinirani lijekovi učinkovitiji su od samih lijekova.Preventivni lijekovi su učinkovitiji od lijekova nakon kontaminacije.Preventivni lijekovi općenito koriste dvostruki antibiotik (penicilin 100u/mL plus streptomicin 100µg/mL).Nakon kontaminacije, način čišćenja mora biti 5 do 10 puta veći od uobičajene količine.Lijek treba koristiti 24 do 48 sati nakon dodavanja, a zatim ga zamijeniti uobičajenom rutinom.Kulturna tekućina.Ova metoda može biti učinkovita u ranim fazama kontaminacije.Osim penicilina i streptomicina, korišteni antibiotici također mogu uključivati ​​gentamicin, kanamicin, polimiksin, tetraciklin, nistatin, itd. Obično se koriste 400 do 800 μg/mL kanamicina ili 200 μg/mL tetraciklina.Podloga se mijenja svaka 2 do 3 dana i prenosi 1 do 2 generacije za tretiranje.Posljednjih godina objavljeno je da su 4-fluoro, 2-hidroksikinolin (Ciprofloksacin, Cip), derivat pleu-romutilina (derivat pleu-romutilina, BM-Cyclin2: BM-1 i derivat tetraciklina (BM-2)) antibiotici učinkovit u uništavanju mikoplazme kada se koristi sam ili u kombinaciji.Ova tri antibiotika se pripremaju u 250X koncentrirane otopine u PBS-u i čuvaju na -20°C za kasniju upotrebu.Upotrebna koncentracija Cip je 10 μg/mL, BM-1 je 10 μg/mL, a BM-2 je 5 μg/mL.Kada koristite, prvo aspirirajte kontaminirani medij kulture, dodajte RPMI1640 medij kulture koji sadrži BM-1, zatim aspirirajte medij kulture nakon 3 dana, dodajte RPMI1640 medij kulture koji sadrži BM-2 i kulturi 4 dana, i tako dalje 3 uzastopna dana .ciklusa, sve dok se 33258 fluorescentno bojenom mikroskopijom ne dokaže da je mikoplazma eliminirana, tada se dodaje normalni medij za kulturu i pasažu 3-4 puta.

2. Obrada toplinom

Inkubacija kontaminirane kulture tkiva na 41°C tijekom 18 sati može ubiti mikoplazmu, ali ima štetne učinke na stanice.Stoga bi prije tretmana trebalo provesti preliminarni test kako bi se istražilo vrijeme zagrijavanja koje može ubiti mikoplazmu u najvećoj mjeri i imati najmanji utjecaj na stanice.Ova metoda je ponekad nepouzdana.Ako se prvo tretira lijekovima, a zatim zagrije na 41°C, učinak će biti bolji.

3. Koristite serum specifičan za mikoplazmu

Kontaminacija mikoplazmom može se ukloniti s 5% imunosnim serumom zečje mikoplazme (hemaglutinacijski titar 1:320 ili više).Budući da specifično protutijelo može inhibirati rast mikoplazme, postaje negativno 11 dana nakon liječenja antiserumom i ostaje negativno 5 mjeseci kasnije.je negativan.Međutim, ova metoda je problematičnija i nije tako prikladna i ekonomična kao uporaba antibiotika.

4. Ostale metode

Osim navedenih metoda uklanjanja kontaminacije, postoje i metode inokulacije i sterilizacije životinja, metode fagocitoze makrofaga, metode dodavanja bromouracila kontaminiranojboce kulturei zatim ih ozračiti svjetlom, te metode filtracije, itd., ali sve su one problematičnije i neučinkovitije.Stoga, kada jednom dođe do kontaminacije mikoplazmom, osim ako nije od posebno važne vrijednosti, općenito se odbacuje i ponovno uzgaja.

kontaktirajte Whatsapp & Wechat: +86 180 8048 1709